Сюжет иконы связан с важнейшим событием Евангелия – Воскресением Господним. Сам момент Воскресения евангелистами не описан. Однако в Евангелии подробно рассказывается о том, что на следующий день после погребения Христа, согласно иудейскому обычаю, праведные жены пришли ко Гробу Господню помазать миром Его тело. Они увидели, что Гроб был пуст, а на нем сидел ангел в белых одеждах, возвестивший женам о воскресении Спасителя.

Иконография сюжета с женами-мироносицами у Гроба Господня приобрела устойчивую схему в средневизантийский период. В древнерусском искусстве наиболее ранние сохранившиеся изображения восходят к XIV веку. В XVI столетии иконографическая схема усложняется введением дополнительных деталей: увеличивается количество жен-мироносиц, на заднем фоне появляется Иерусалимская стена с башней. Изображение двух ангелов, сидящих по сторонам гроба, как на представленной иконе, – довольно редкая деталь, основанная на текстах евангелистов Луки и Иоанна.

Яркий колорит передает радость Воскресения Христова. Торжественность момента благовестия подчеркнута цветом одежд – белых у ангелов и киноварно-охристых у жен. Пересечение двух композиционных диагоналей, одну из которых образуют сидящие по сторонам Гроба ангелы, а другую – цветовая перекличка одежд жен и спящих воинов, придает повествованию динамику. Белые погребальные пелены воскресшего Христа, контрастирующие с темным фоном пустого Гроба, изображенные на перекрестии этих диагоналей, являются смысловым и композиционном центром иконы.

Икона имеет большие размеры и, предположительно, была написана как храмовый образ для местного ряда иконостаса церкви, посвященной женам-мироносицам. Храмы в честь жен-мироносиц, согласно источникам, в XVI веке существовали в Новгороде и Пскове.

В Третьяковскую галерею икона поступила из собрания А.И. Анисимова – известного русского исследователя византийского и древнерусского искусства. До поступления в галерею икона подверглась реставрации. В связи с этим обстоятельством точная атрибуция памятника затруднена. Традиционно исследователи связывают икону с искусством Новгорода XVI века. «Жены-мироносицы» – уникальная, сохранившаяся до наших дней храмовая икона с редкой иконографией.