Эта древнейшая русская икона с изображением Благовещения принадлежит к числу самых крупных по размеру произведений домонгольского времени. В соответствии с евангельским текстом (Лк. 1: 26–38) на ней изображены архангел Гавриил, который обращается к Приснодеве Марии с приветствием и словами благой вести, и Мария, склонившая голову и всем своим обликом выражающая повиновение Божественной воле. Простая, лаконичная и очень выразительная композиция иконы, вероятно, восходит к образцам монументальной живописи: изображениям Благовещения на предалтарных столбах византийских и древнерусских храмов.

К числу сравнительно редких иконографических деталей относится изображение Младенца Христа в лоне Богоматери: согласно традиционным толкованиям, Христос явился в мир в тот момент, когда Мария произнесла слова: «Да будет мне по Слову Твоему». Младенец представлен полуобнаженным, с набедренной повязкой, что напоминает об изображениях распятого Спасителя и символически предвосхищает Его грядущее жертвенное служение. Еще одно изображение Христа – Иисус Христос Ветхий Деньми – располагается в сегменте неба вверху. Это тип иконографии, основанный на ветхозаветном видении пророка Даниила (Дан. 7), в котором соединяются черты Бога Отца и Бога Сына, или, точнее, через Сына раскрываются образ и воля невидимого Отца.

Икона происходит из Успенского собора Московского Кремля, куда попала из Новгорода в середине XVI века. О перенесении в Москву образа «Благовещение Святыя Богородицы», взятого царем и великим князем Иваном Грозным «в великом Новгороде в Юрьеве монастыре», сообщается в двух исторических источниках: в Деяниях московского церковного собора 1553/1554 года и во II Новгородской летописи под 1561 годом. Скорее всего, этот образ в числе других древних памятников был привезен в Москву после страшного пожара 1547 года и вплоть до конца XVI века служил храмовой иконой Благовещенского собора Кремля, а затем был перенесен в Успенский собор.

Строительство Георгиевского собора Юрьева монастыря в Новгороде было завершено в 1130 году, и именно в то время могло быть создано «Благовещение». По другой версии, икона первоначально являлась храмовым образом церкви Благовещения на Городище, которая была построена в 1103 году по повелению князя Мстислава Владимировича и находилась неподалеку от Юрьева монастыря, на противоположном берегу Волхова. В Юрьев монастырь икона могла быть перенесена в связи с перестройкой Благовещенской церкви в 1342–1343 годах. Позднее предание ошибочно связывает происхождение иконы с Великим Устюгом, отчего она часто называется «Благовещение Устюжское».

Исполнителем иконы мог быть приехавший из Киева вместе с князем Мстиславом греческий мастер или русский иконописец, прошедший византийскую выучку. Об этом свидетельствует и изысканность живописных приемов, и сложная, насыщенная богословскими ассоциациями иконографическая программа.